HPLC kromatografija vrst stolpcev
2.kromatografski stolpec (vrsta vrtenja)
3.Chromatografski stolpec (priročnik)
*** ceni
Opis
Tehnične parametre
HPLC kromatografija stolpcevso bistvene komponente v visokozmogljivi tekoči kromatografiji, zasnovani za ločevanje zapletenih mešanic, ki temeljijo na interakcijah med stacionarno fazo in mobilno fazo. Obstaja več vrst stolpcev, vsaka prilagojena za posebne aplikacije. Stolpci reverzne faze (RP) so najpogostejši, z uporabo nepolarne stacionarne faze, kot sta C18 ali C8, idealno za ločevanje polarnih in nepolarnih organskih spojin. Stolpci z normalno fazo (NP) uporabljajo polarno stacionarno fazo in nepolarno mobilno fazo, primerno za polarne analize, kot so sladkorji in steroidi. Kolumni za izmenjavo ionov ločujejo ione na podlagi njihovega naboja, pri čemer z napolnjenimi stacionarnimi fazami zadrževanje in eluiranje analitov z ionskimi interakcijami; V biokemičnih aplikacijah se pogosto uporabljajo. Kolumni kromatografije v velikosti (SEC) ločujejo molekule po velikosti, pri čemer se večje molekule hitreje eluirajo zaradi omejenega dostopa do poroznih stacionarnih faz, zaradi česar so dragocene za analizo polimerov in beljakovin. Kiralni stolpci imajo kiralne stacionarne faze za ločevanje enantiomerov, ki so ključne v farmacevtskih izdelkih, kjer imajo lahko stereoizomeri različne biološke aktivnosti. Poleg tega se za polarne spojine, ki v stebrih RP niso dobro ponovno omejene, uporabljajo hidrofilne interakcijske kromatografije (HILIC), ki nudijo alternativni mehanizem ločevanja. Vsaka vrsta stolpcev služi različnim analitičnim potrebam, kar zagotavlja natančne in učinkovite ločitve v različnih panogah.
|
|
|
|
|
Parametri
Uvod
Osnovno načelo
Kiralni stolpci igrajo ključno vlogo pri ločevanju enantiomerov, ki so stereoizomeri, ki so medsebojno zrcalijo slike, vendar ne prekrivajo. Ti stolpci uporabljajo kiralne stacionarne faze (CSP), ki so običajno zgrajene z imobilizacijo optično aktivnih monomerov na silikagelu ali polimerni nosilci. CSP ustvarjajo kiralno okolje v stolpcu, kar omogoča razlikovanje enantiomerov na podlagi njihovih različnih fizičnih interakcij s tem okoljem. Mehanizem za kiralno ločljivost je v več vrstah interakcij, ki se lahko pojavijo med kiralnimi molekulami analita in CSP. Te interakcije vključujejo vezanje vodika, interakcije dipol-dipola, zlaganje π-π, elektrostatične sile, hidrofobne učinke in stericne ali prostorske interakcije. Kombinacija teh interakcij omogoča, da vsak enantiomer različno komunicira s CSP, kar ima za posledico različna zadrževalna časi in tako olajša njihovo ločitev. Ta sposobnost je ključnega pomena na področjih, kot so farmacevtska zdravila, kjer lahko enantiomeri imajo različne farmakološke aktivnosti ali strupenosti, kar zahteva natančne analitične metode za njihovo ločevanje in analizo.
vrste
Glede na načelo načrtovanja in stacionarno fazo lahko kiralne stolpce razdelimo na številne vrste, vključno s čopičem kiralnega stolpca, celulozni kiralni stolpec, ciklodekstrin kiralni stolpec in tako naprej.
Čopič kiralni stolpec
Čopič kiralni kolona je vrsta kiralne kromatografske stolpce, zasnovan za ločevanje enantiomerov. Odlikuje ga stacionarna faza, sestavljena iz kiralnih polimerov ali oligomerov, kovalentno pritrjenih na podporo, kar ustvarja "krtačo podobno" strukturo. Ta razporeditev zagotavlja visoko površino in več mest medsebojne interakcije, kar povečuje sposobnost stolpca za razlikovanje med enantiomeri skozi različne medmolekularne sile. Čopilni kiralni stolpci so cenjeni zaradi svoje vsestranskosti, kar omogoča prilagoditev, da učinkovito cilja na specifične kiralne ločitve.
- Na podlagi zasnove vzorca prepoznavanja tri točke je stacionarna faza razdeljena na dve vrsti: π-elektronski sprejemni tip in π-elektronski tip, ki zagotavlja tip.
- π-Electron, ki sprejema stacionarno fazo, kot je (r) -n -3, 5- dinitrobenzoylphenilglycin, vezan na -aminopropil silikagel, je pogostejši.
- Ta vrsta stolpca je enostavno sintetizirati in ima faktor visoke zmogljivosti in faktor izbire, vendar je ponavadi učinkovit le za aromatične spojine.
Kiralni stolpec tipa celuloze
Celulozni kiralni stolpec uporablja celulozo, naravno prisoten kiralni polisaharid, kot stacionarno fazo. Kiralno okolje v celuloznih stolpcih izhaja iz njegove spiralne molekularne strukture, ki ustvarja edinstveno tridimenzionalno razporeditev, ki lahko s stereospecifičnimi interakcijami razlikuje enantiomere. Ti stolpci so zelo učinkoviti za ločevanje širokega spektra kiralnih spojin, vključno s farmacevtskimi izdelki, agrokemikali in naravnimi proizvodi. Njihova sposobnost zagotavljanja zanesljivih in učinkovitih kiralnih ločitev je priljubljena izbira v analitični in pripravljalni kromatografiji.
- Stacionarna faza lahko vključuje mikrokristalni triacetat, tribenzojsko kislino, trifenilno aminokislinsko solno celulozo itd.
- Nekatere vrste celuloznih stolpcev, kot so stolpci OD, kažejo zelo visoke ločitve pod določenimi pogoji.
- Celuloza in amiloza sta linearni polimeri D-glukoze, povezani z -1, 4- glukozid ali -1, 4- glukozidni vezi. Zaradi kiralnosti glukoznih enot ima vsaka polimerna veriga vijačni utor, ki obstaja vzdolž hrbtenice celuloze. Enantiomeri vstopijo v utor, enantiomeri pa so ločeni predvsem z adsorpcijo in vključenostjo.
Kiralni stolpec tipa ciklodekstrin
Kiralni stolpec ciklodekstrin uporablja ciklodekstrine kot stacionarno fazo za kiralne ločitve. Ciklodekstrini so ciklični oligosaharidi s kiralno votlino, ki omogočajo stereospecifične interakcije z enantiomeri. Tvorijo vključitvene komplekse, kjer se prileganje enantiomerov v votlino razlikuje, kar olajša njihovo ločitev. Ti stolpci so zelo učinkoviti za reševanje široke palete kiralnih spojin, vključno s farmacevtskimi izdelki, okusi in dišavi. Njihova selektivnost in učinkovitost sta priljubljena izbira tako v analitični kot pripravljalni kromatografiji za doseganje optične ločljivosti izomera.
- Molekule ciklodekstrina tvorijo stožec, ki tvori jamo, katere velikost por je določena s številom glukopiranoznih enot, ki sestavljajo ciklodekstrin.
- Pogoste vrste ciklodektrinov vključujejo in vsebujejo 6, 7 in 8 glukopiranozne enote, med katerimi je kiralna fiksacija -ciklodekstrin najpogosteje uporabljena.
- Posebna struktura ciklodekstrina ima različne značilnosti ločevanja od polisaharidnih kiralnih kromatografskih stolpcev. Molekule ciklodekstrina so hidrofilne na zunanji strani in na notranji strani lipofilne. Zato lahko lipofilne organske molekule s primerno velikostjo in obliko, zlasti aromatične spojine, vstopijo v votlino ciklodekstrina in tvorijo nekovalentno vez z vključitvenim kompleksom gostitelja in za kiralno ločitev.
Prijave
Analiza kiralne biološke aktivnosti
Na področju biokemije in biomedicine se kiralni kromatografiji uporabljajo za analizo kiralnih spojin z biološko aktivnostjo, kot so zdravila, pesticidi, naravni proizvodi itd.
Kiralna priprava
V farmacevtskih, pesticidih, kozmetičnih in drugih panogah se kiralna kromatografija stolpci uporabljajo za ločevanje in čiščenje kiralnih spojin za izboljšanje čistosti in učinka izdelkov. Na primer, kiralna zdravila z visoko čistostjo lahko pripravimo s kiralno kromatografijo, da zadovoljijo potrebe kliničnega zdravljenja in razvoja zdravil.
Kiralni polimeri
Na področju organske sinteze, kiralna kataliza in druga področja igrajo tudi kiralno kromatografsko kolono. Na primer, kiralne kromatografije lahko uporabimo za ločevanje in čiščenje polimernih materialov s specifično kiralnostjo, kar zagotavlja močno podporo za raziskovanje in uporabo polimernih materialov.
Previdnostni ukrepi
Izberite desni stolpec
Glede na kemijske lastnosti in molekularno strukturo vzorca, ki jo je treba preizkusiti, izberite desno kiralno vrsto stolpca. Različne vrste stacionarnih faz imajo različne značilnosti ločevanja in območja uporabe, zato jih je treba izbrati v skladu s posebnimi okoliščinami.
Optimizacija pogojev ločevanja
Pri uporabi kiralnih stolpcev je treba optimizirati pogoje ločevanja, kot so sestava mobilne faze, vrednost pH, pretok itd. Izbira teh pogojev bo neposredno vplivala na ločitveni učinek in stopnjo ločevanja.
Bodite pozorni na vzdrževanje in vzdrževanje stolpca
Da bi podaljšali življenjsko dobo kiralnega stolpca in izboljšali učinek ločevanja, je treba stolpec redno očistiti in vzdrževati. Hkrati je treba biti pozoren, da se med uporabo izognete poškodbam stolpca, na primer izogibanje uporabi nezdružljivih topil in izogibanje prekomernemu tlaku.
Snemanje in analiza eksperimentalnih rezultatov
Pri izvajanju poskusov s kiralnimi stolpci je treba podrobno zabeležiti pogoje delovanja in eksperimentalne rezultate. Z analizo in primerjavo eksperimentalnih rezultatov lahko še dodatno optimiziramo pogoje ločevanja in izboljšamo učinek ločevanja.
Polimerni hilijski stolpec na osnovi polimera
Polimerna hilicna stolpec na osnovi polimera vHPLC kromatografija vrst stolpcevje učinkovito orodje za ločevanje polarnih spojin, ki igra pomembno vlogo pri visokozmogljivi tehnologiji tekočine kromatografije (HPLC). Podrobno bo uvedeno iz značilnosti, načel, aplikacij in varnostnih ukrepov hilijskih stolpcev na osnovi polimera.
Značilnosti
Visoka selektivnost
Zaradi polarnih skupin na fiksni fazi hilicnega stolpca na osnovi polimera lahko te skupine močno komunicirajo s polarnimi spojinami s pomočjo vodikovega vezanja, interakcije dipol-dipola in drugih mehanizmov, da bi dosegli visoko selektivno ločevanje.
Primerno za različne spojine
Polimerni hilijski stolpec je primeren za ločitev številnih vrst polarnih spojin, kot so sladkorje, aminokisline, peptidi, nukleotidi itd. Te spojine imajo pomembne fiziološke funkcije v živih organizmih, zato ima polimerna hilicna stolpca široko območje uporabe v biološki analizi v biološki vzorci.
Trajnost
Polimerna stacionarna faza ima ponavadi dobro kemično in mehansko stabilnost, zato ima hilicni stolpec na osnovi polimera dobro trajnost in lahko ustreza potrebam dolgoročne, visokofrekvenčne analize.
Načelo
Načelo ločevanja v polimernem HILIC stolpcu temelji predvsem na mehanizmu hidrofilne interakcijske kromatografije (HILIC). V načinu Hilic je stacionarna faza polimer s polarnimi skupinami, ki lahko vežejo vodo v mobilni fazi, da tvorijo "vodno bogati plast". Analiti lahko vstopijo v to "vodno plast" in jih ohranijo, medtem ko lahko različne spojine ločimo zaradi različnih koeficientov particije v "vodni plasti" in mobilni fazi. Poleg tega lahko polarne skupine na nepremični fazni površini tvorijo tudi vodikove vezi in dipol-dipolne interakcije z analiti, da se še povečajo ločitveni učinek.
prijave
Analiza sladkorja
Polimerni HILIC stolpec lahko učinkovito loči različne sladkorje, kot so glukoza, fruktoza, galaktoza in tako naprej. Ti sladkorji igrajo pomembno vlogo pri oskrbi z energijo in strukturni podpori v organizmih, zato je njihova kvantitativna analiza zelo pomembna za preučevanje bioloških vzorcev.
Analiza aminokislin in peptidov
Polimerni HILIC stolpec lahko loči različne aminokisline in peptide, kot so serin, glutaminska kislina, arginin itd. Te spojine so osnovni gradniki beljakovin, zato ima njihova kvantitativna analiza ključno vlogo pri raziskavah beljakovin.
Analiza nukleotidov
Polimerni stebri na osnovi polimera lahko ločijo različne nukleotide, kot so adenilat, gvanilat, citozinski nukleotidi itd. Nukleotidi so osnovne sestavine DNK in RNA, zato je njihova kvantitativna analiza za raziskave nukleinske kisline zelo pomembna.
Previdnostni ukrepi
Izbira mobilne faze
Del mobilne faze mora vsebovati polarno topilo (vsaj 3%), tako da se hidrofilni sloj lahko adsorbira na stacionarno fazno površino. Zmes acetonitrila in vode se običajno uporablja kot mobilna faza, učinek ločevanja pa se nadzoruje s prilagajanjem razmerja obeh.
01
Priprava vzorca
Ker je šibka mobilna fazna skupina v HILIC razdeljena na acetonitril, ima tanjši vzorca v idealnem primeru enako acetonitrilno sestavo kot začetni pogoj mobilne faze. Vendar pa ima večina polarnih analitov omejeno topnost v topilih z visokim organskim razmerjem, zato je acetonitril\/metanol (75\/25) priporočljiv kot tanjši vzorca. Če je vzorec topen v vodi, ga lahko raztopimo z vodo in nato pred injiciranje razredčimo z acetonitrilom.
02
Čas ravnotežja
Nezadostni čas za ravnovesje bo povzročil odmik časa zadrževanja. Zato je treba pred uporabo polimernih hilijskih stolpcev zagotoviti, da so stolpci ustrezno uravnoteženi.
03
Ohranjanje stolpcev
Kratkoročno skladiščenje je mogoče postaviti v acetonitril\/vodo (95\/5), če ga ne uporabljamo dlje časa, ga je treba shraniti v čistem acetonitrilu, čepi na obeh koncih kromatografske kolone pa se zategnejo in zaprejo, da preprečimo, da bi se stolpca "sušila".
04
Kolumni hidrofilne interakcijske kromatografije (HILIC) na osnovi polimera predstavljajo pomemben napredek v tehnologiji HPLC, ki ponuja obetavne aplikacije in znatno vrednost raziskovanja. Ti stolpci se odlično odrežejo zaradi visoke selektivnosti, kar omogoča učinkovito ločitev polarnih spojin, ki jih je pogosto izziv za analizo s tradicionalnimi metodami obrnjene faze. Njihova vsestranskost jim omogoča, da ravnajo s širokim spektrom spojin, od majhnih molekul do biomolekul, kot so peptidi in nukleotidi, zaradi česar so pri biološki analizi vzorca neprecenljivi. Trajnost polimernih HILIC stolpcev prispeva tudi k njihovi zanesljivosti pri dolgoročni uporabi. Da bi zagotovili natančne in ponovljive rezultate, je ključnega pomena, da natančno izberete mobilno fazo, optimizirate postopke priprave vzorca, omogočite zadosten čas uravnoteženosti stolpcev in se držite ustreznih praks shranjevanja stolpcev. Ti premisleki pomagajo ohraniti uspešnost stolpca in podaljšati njegovo življenjsko dobo, kar krepi njen pomen pri sodobni analitični kemiji.
Priljubljena oznake: HPLC kromatografija Vrste stolpcev, China HPLC kromatografija Proizvajalci, dobavitelji, tovarna
Naslednji
Kolumni monolitne kromatografijePošlji povpraševanje
