Centrifuga z nizko hitrostjo
Opis
Tehnične parametre
A centrifuga z nizko hitrostjovrti, da ustvari centrifugalno silo, ki ločuje komponente različnih gostot v vzorcu. Med ločevanjem celic se celice, celični fragmenti in druge biomolekule ločijo na različne lokacije s centrifugalno silo, odvisno od njihove mase in gostote. Ko se vzorčna cev vrti z veliko hitrostjo znotraj rotorja centrifuge, je centrifugalna sila na različnih komponentah mešanice sorazmerna z njihovo maso, nanjo pa vplivata tudi hitrost in polmer vrtenja. Večje celice ali delci se vržejo proti dnu cevi za centrifugo, medtem ko manjše komponente ostanejo v zgornjem sloju. To načelo ločitve, ki temelji na gostoti in masi, naredi centrifuge z nizko hitrostjo idealno orodje za ločevanje celic.
Postopek centrifuge z nizko hitrostjo pri ločevanju celic
| ◇Priprava vzorca: Najprej morate pripraviti vzorec celice, da se loči. To običajno vključuje celične kulture, vzorce krvi ali druge biološke vzorce, ki vsebujejo celice. Prepričajte se, da je bil vzorec pravilno predhodno obdelan pred centrifugiranjem, kot so redčenje, prebava ali filtracija. ◇ Izberite pravo cev centrifuge: Izberite desno cev centrifuge glede na prostornino vzorca in potrebno centrifugalno silo.Centrifuga z nizko hitrostjoS običajno podpirajo različne cevi za centrifuge, kot so 15ml, 50 ml ali 100 ml. Prepričajte se, da je centrifugalna cev dobre kakovosti in zapečatena, da se izognete puščanju med centrifugalnim postopkom. ◇Uravnoteženje vzorcev: Preden namestite vzorce v centrifugo, morate zagotoviti, da so vzorci v vseh cevi za centrifugo enake ali podobne mase. To je mogoče storiti s tehtanjem vzorčne mase v vsaki cevi za centrifugo. Vzorčna ravnovesje je bistvenega pomena za preprečitev, da bi centrifuga med delovanjem ustvarila vibracijo in hrup. |
|
|
|
◇ Nastavite centrifugalne parametre: Glede na eksperimentalne zahteve določite ustrezno centrifugalno hitrost in čas. Razpon hitrosti centrifug z nizko hitrostjo je običajno med 300 vrtljaji in 10, 000 RPM, čas pa je mogoče prilagoditi glede na vrsto vzorca in želeni učinek ločevanja. ◇ Začnite centrifugo: V rotor centrifuge postavite uravnoteženo cev za centrifugo in zaprite pokrov centrifuge. Nato začnite centrifugo in centrifugo v skladu s parametri. Med procesom centrifuge bodite pozorni na tekoče stanje centrifuge, da zagotovite, da ne bo nenormalne vibracije ali hrupa. ◇ Vzorce zbirate in obdelajte po ločitvi: Po centrifugiranju izklopite centrifugo in počakajte, da se popolnoma ustavi. Cev centrifuge se nato previdno odstrani in oborino supernatanta in celice zbiramo v ločene posode z uporabo ustreznega orodja, kot je pipeta. Glede na potrebe poskusa je mogoče celične padavine še naprej očistiti, gojiti ali analizirati. |
Upoštevanje centrifuge z nizko hitrostjo pri ločevanju celic
● Izbira prave centrifugalne hitrosti in časa: Izbira hitrosti in časa je ključnega pomena za učinkovitost ločevanja celic. Previsoka hitrost rotacije lahko privede do rupture ali poškodbe celic, medtem ko lahko predolgo privede do združevanja celic ali nepopolnih padavin. Zato je treba izbiro centrifugalnih parametrov upoštevati glede na vrsto, velikost in gostoto celic.
● Zagotovite ravnovesje vzorca: Vzorčno ravnovesje je ključno za preprečevanje, da bi centrifuga med delovanjem ustvarila vibracije in hrup. Pri namestitvi vzorcev je treba zagotoviti, da so vzorci v vseh cevi za centrifuge enake ali podobne mase. Če obstaja velika razlika v kakovosti vzorca, lahko v lažjo cev za centrifugo dodamo ustrezno količino pufra ali normalne fiziološke raztopine, da dosežete ravnovesje.
● Izberite pravo cev centrifuge: Kakovost in tesnost cevi centrifuge prav tako pomembno vplivata na učinkovitost ločevanja celic. Kakovostne centrifugalne cevi imajo dobro tesnjenje in korozijsko odpornost, kar lahko učinkovito prepreči uhajanje vzorcev in kontaminacijo. Hkrati je treba izbrati tudi specifikacijo centrifugalne cevi glede na prostornino vzorca in zahtevano centrifugalno silo.
● Bodite pozorni na vzdrževanje in vzdrževanje centrifuge: Redno čistite centrifugalno komoro in rotor centrifuge, da preprečite preostalo kontaminacijo vzorca. Čisto obrišite čas po uporabi, da se izognete koroziji, ki jo povzroča tekoča ostanek. Hkrati je treba redno preverjati tudi napajalni kabel in vtič ter druge komponente centrifuge, da se zagotovi, da so nedotaknjeni in se izogibajo varnostnim nevarnostim.
Uporaba centrifuge z nizko hitrostjo v biotehnologiji
● Celično zdravljenje v genskem inženiringu: V genetskem inženiringu je treba celice pogosto gojiti, transficirati, pregledovati in druge zdravljenje. Za korake, kot so koncentracija in pranje celičnih suspenzij, pa tudi zbiranje celic po transfekciji, se lahko uporabljajo centrifuge z nizko hitrostjo. S centrifugiranjem je mogoče odstraniti nečistoče in neprekinjene celice v celični kulturi, učinkovitost in čistost transfekcije genov pa je mogoče izboljšati.
● Čiščenje beljakovin in izolacija: V raziskavah beljakovin je treba specifične beljakovine očistiti iz zapletenih bioloških vzorcev. Centrifuge z nizko hitrostjo se lahko uporabijo za začetno razjasnitev beljakovinskih raztopin in odstranjevanje nečistoč, kot so celične naplavine, nukleinske kisline itd. Z centrifugalnim zdravljenjem lahko dobimo relativno čista raztopina beljakovin, kar je osnova za poznejše korake čiščenja.
● Izolacija in čiščenje virusnih delcev: Virusni delci imajo običajno specifično gostoto in velikost in jih lahko ločimo in očistimo s centrifugami z nizko hitrostjo. Na primer, v viroloških raziskavah lahko virusne delce ločimo od celičnih kultur z uporabo diferencialne centrifugiranja. Ta metoda izkorišča razlike v centrifugalnih silah z različnimi hitrostmi, da ločijo virusne delce od drugih celičnih komponent.
● Proizvodnja in nadzor kakovosti bioloških zdravil: V proizvodnem procesu bioloških zdravil se centrifuge z nizko hitrostjo pogosto uporabljajo za razjasnitev tekočine za celično kulturo, odstranjevanje celičnih naplavin in začetno ločevanje zdravil. Poleg tega se lahko pri nadzoru kakovosti zdravil uporabijo tudi centrifuge z nizko hitrostjo za odkrivanje ključnih kazalnikov, kot sta porazdelitev velikosti in stabilnost delcev zdravil.
Uporaba centrifuge z nizko hitrostjo pri ločevanju delcev virusa
◇ Primarna ločitev: Centrifuge z nizko hitrostjo se pogosto uporabljajo za primarno ločevanje virusnih delcev. V procesu ekstrakcije virusa lahko velike delce, kot so celične fragmente in nečistoče, odstranimo z nizko hitrostjo centrifugiranja in mogoče dobiti relativno čiste suspenzije virusa. Ta korak olajša poznejše korake čiščenja.
◇ obogatitev virusa: V nekaterih primerih se lahko za obogatitev virusa uporabljajo tudi centrifuge z nizko hitrostjo. S prilagoditvijo časa in hitrosti centrifuge lahko delce virusa odložimo na dnu cevi za centrifugo, tako da lahko koncentrirani vzorec virusa dobimo z ekstrahiranjem supernatanta. Vendar je treba opozoriti, da je učinek obogatitve centrifug z nizko hitrostjo relativno omejen, za priložnosti, kjer so potrebni virusi visoke čistosti, pa so običajno potrebne druge metode čiščenja.

V kombinaciji z drugimi metodami čiščenja
● Diferencialna centrifugalna metoda: Diferencialna centrifugalna metoda je metoda ločevanja delcev različnih velikosti in gostote z uporabo različnih hitrosti in centrifugalnih časov. Diferencialno centrifugiranje se pogosto uporablja za nadaljnje odstranjevanje nečistoč in koncentriranje virusa med čiščenjem virusa. Po odstranitvi velikih delcev, kot so organele z nizko hitrostjo centrifugiranje, se virusni delci oborijo z veliko hitrostjo centrifugiranja.
● Metoda centrifugiranja gradienta gostote: Metoda centrifugiranja gradienta gostote je uporaba medijev različnih gostot za oblikovanje gradienta, tako da se delci različnih gostot v metodi gradienta usedejo na različne položaje. Pri čiščenju virusa se centrifugiranje gradienta gostote pogosto uporablja za ločevanje virusnih delcev od drugih nečistoč podobne gostote (kot so beljakovine, nukleinske kisline itd.). S pripravo gradienta gostote v cevi v centrifugi vnaprej in nato dodajanjem virusne suspenzije na površini gradienta za centrifugiranje se virusni delci naselijo v določenem položaju v gradientu, da tvorijo območje usedline.
● Metoda padavin: Način padavin je oboriti delce virusa z dodajanjem kemičnih reagentov. Pogosta oborilna sredstva vključujejo amonijev sulfat, polietilen glikol (PEG) itd. Metoda padavin se lahko uporablja za nadaljnje čiščenje virusa. S prilagoditvijo koncentracije in pH vrednosti oborine lahko delce virusa selektivno oborimo, da odstranimo nečistoče.
● Metoda filtracije: Metoda filtracije je metoda ločevanja virusnih delcev od drugih nečistoč s kolono gel filtracijske kromatografije. Kromatografski stolpec gel filtra se loči glede na velikost delcev, velike molekule pa najprej iztekajo iz kromatografske kolone, majhne molekule pa kasneje iztekajo. Z izbiro ustreznih gel in kromatografskih pogojev lahko virusni delci učinkovito ločimo od drugih nečistoč.
● Elektroforetska metoda: Elektroforetska metoda je uporaba električnega polja za izdelavo napolnjenih delcev v metodi migracije električnega polja. Pri čiščenju virusa se elektroforeza pogosto uporablja za ločevanje virusnih delcev od drugih nabitih nečistoč. Učinkovito ločevanje in čiščenje virusnih delcev je mogoče doseči z izbiro ustreznih pogojev elektroforeze in medijev.
Priljubljena oznake: centrifuga z nizko hitrostjo, Kitajska proizvajalci centrifuge z nizko hitrostjo, dobavitelji, tovarna
Naslednji
Stroj za centrifugo v laboratorijuPošlji povpraševanje













